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凍存管該如何進行冷凍呢╃│?看看本篇吧
釋出時間│₪│◕:2022-08-17   點選次數│₪│◕:149次
  凍存管又稱菌種儲存管╃✘₪、磁珠儲存管╃✘₪、磁珠凍存管▩•↟·•。微生物實驗室常用的菌種儲存方法有牛奶法╃✘₪、甘油法╃✘₪、斜面法等▩•↟·•。複雜程度各異╃╃,效果也差別很大▩•↟·•。
 
  凍存管的使用是一門學問╃╃,並不是開啟液氮罐╃✘₪、放入凍存管╃✘₪、關上液氮罐這樣簡單的三部曲可以完成的▩•↟·•。科學正確地使用凍存管╃╃,可以避免樣本的損失╃╃,並保護試驗人員的安全▩•↟·•。
 
  下面讓我們一起來了解一下凍存管的冷凍步驟吧
 
  用預熱的PBS溶液洗滌細胞╃╃,吸取溶液╃╃,含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆蓋細胞(薄薄的液層足夠╃╃,胰蛋白酶和EDTA的濃度需要根據細胞系確定)▩•↟·•。
 
  37℃孵育細胞3-5分鐘▩•↟·•。
 
  細胞從底部脫離之後╃╃,終止孵育╃╃,加入含有血清的培養基╃╃,用移液器輕輕地懸浮細胞▩•↟·•。
 
  離心細胞懸液(500xg,5分鐘)╃╃,用含有血清的培養基重新懸浮▩•↟·•。
 
  細胞計數▩•↟·•。
 
  離心細胞懸液(500xg,5分鐘)╃╃,去除上清液╃╃,用適量體積的含有血清的培養基重新懸浮細胞▩•↟·•。
 
  以1:1體積比混合細胞和凍存液(60%培養基╃╃,20%胎牛血清╃╃,20%DMSO)╃╃,然後轉移到Cryo.sTM凍存管中▩•↟·•。凍存的細胞密度為1-5×106個/毫升▩•↟·•。
 
  含有細胞的Cryo.sTM凍存管建議以−1K/min的速率降溫╃╃,可以將凍存管置於−70℃含有異丙醇的容器中▩•↟·•。如果Cryo.sTM凍存管儲存其他樣品╃╃,可以直接放置在−20℃╃╃,−70℃或者液氮的氣相▩•↟·•。
 
  為了確保樣品冷凍均勻╃╃,4mL和5mL的Cryo.sTM凍存管需要先置於在−20℃冰箱過夜╃╃,然後再轉移到−70℃或者液氮的氣相▩•↟·•。
 
  然後轉移Cryo.sTM凍存管到液氮罐▩•↟·•。為了避免汙染(如支原體)和安全考慮╃╃,請將Cryo.sTM凍存管置於液氮的氣相╃╃,切勿置於液相▩•↟·•。

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